細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

人原代肝星狀細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持人原代肝星狀細(xì)胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含人原代肝星狀細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于人原代肝星狀細(xì)胞的培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白 Recombinant Matrix Metalloproteinase 13 (MMP13)

CD40LG Protein Human 重組人 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白

COLEC10重組小鼠 COLEC10 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

ACVR1 Protein Canine 重組狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

FASLG重組人 Fas Ligand / FASLG / CD95L 蛋白 Protein

大鼠大內(nèi)皮素(Big ET)試劑盒 ，英文名： Big ET ELISA Kit

Porcine adiponectin (ADP) ELISA Kit 豬脂聯(lián)素(ADP)試劑盒

ELISA 小鼠白蛋白(mouse Albumin)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforLN(HumanLaminin)ELISAKIT人層連蛋白/板層素

通用型DNA平滑末端連接克隆試劑盒10次

ELISAKitβ-lactamase雞β內(nèi)酰胺酶

小鼠合成酶試劑盒   小鼠合成酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠合成酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠合成酶試劑盒、小鼠合成酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠胰淀素試劑盒   小鼠胰淀素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠胰淀素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠胰淀素試劑盒、小鼠胰淀素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠抑制素試劑盒   小鼠抑制素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠抑制素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抑制素試劑盒、小鼠抑制素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠增殖細(xì)胞核抗原試劑盒   小鼠增殖細(xì)胞核抗原試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠增殖細(xì)胞核抗原試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠增殖細(xì)胞核抗原試劑盒、小鼠增殖細(xì)胞核抗原eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human rheumatoid factor (RF) ELISA Kit 人類風(fēng)濕因子(RF)試劑盒

Humancholyglycine,CGELISAKit 人甘膽酸(CG)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

associatedproteinA,SP-A試劑盒大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)試劑盒規(guī)格：96T/48T

游離脂肪酸化學(xué)比色法定量試劑盒50次

MouseiactParathormone,i-PTHELISAKit小鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)試劑盒規(guī)格：96T/48T

ECHDC1蛋白抗體

凋亡相關(guān)蛋白5抗體

人原代肝星狀細(xì)胞專用培養(yǎng)基COLEC10重組小鼠 COLEC10 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白 Recombinant Matrix Metalloproteinase 13 (MMP13)

FASLG重組人 Fas Ligand / FASLG / CD95L 蛋白 Protein

CD40LG Protein Human 重組人 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白

ACVR1 Protein Canine 重組狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)