酶免elisa試劑盒廣泛應(yīng)用于科研與臨床檢測，其高靈敏度也意味著對操作細(xì)節(jié)敏感，微小的偏差即可導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)曲線異常、背景升高或重復(fù)性差。為確保
酶免elisa試劑盒結(jié)果準(zhǔn)確可靠，使用者必須嚴(yán)格遵循規(guī)范，尤其注意以下關(guān)鍵事項(xiàng)。
1、嚴(yán)格控溫與平衡
所有試劑（尤其是酶標(biāo)抗體和底物）使用前需在室溫（18-25℃）平衡30分鐘。溫度波動會顯著影響抗原-抗體結(jié)合效率及酶反應(yīng)速率，導(dǎo)致OD值漂移。
2、避免反復(fù)凍融標(biāo)準(zhǔn)品與抗體
標(biāo)準(zhǔn)品和檢測抗體應(yīng)按單次用量分裝，-20℃保存，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。每次取用后立即放回freezer，防止蛋白變性失活。
3、精準(zhǔn)加樣，杜絕交叉污染
使用經(jīng)校準(zhǔn)的移液器，配合低吸附槍頭。每加一種試劑更換新槍頭；切勿將已吸取的試劑倒回原瓶；避免槍頭觸碰孔壁或液面，防止非特異吸附。
4、洗板到位且一致
洗板是降低背景的關(guān)鍵。使用自動洗板機(jī)時，確保每孔注滿洗滌液（通常300-400μL），浸泡30秒后再吸干；手工洗板需重復(fù)5次以上，并在吸水紙上拍干（勿擦拭），避免殘留液體稀釋后續(xù)試劑。
5、顯色反應(yīng)嚴(yán)控時間與避光
TMB等顯色底物對光敏感，顯色過程需避光進(jìn)行。嚴(yán)格按照說明書控制顯色時間（通常10-30分鐘），到時立即加入終止液（如2MH?SO?），否則顏色持續(xù)加深，線性喪失。
6、標(biāo)準(zhǔn)曲線必須同步制備
每次實(shí)驗(yàn)都需新鮮配制標(biāo)準(zhǔn)品梯度，并與待測樣本同板檢測。不同批次或不同板間的標(biāo)準(zhǔn)曲線不可互換，否則定量無效。
7、樣本預(yù)處理不可忽視
血清/血漿樣本需充分離心（≥1500×g，10分鐘）去除顆粒；高脂或溶血樣本可能干擾檢測，必要時稀釋或過濾。組織勻漿液需離心取上清，避免細(xì)胞碎片堵塞孔底。
8、合理設(shè)置對照組
必須包含：空白孔（僅加緩沖液）、零標(biāo)準(zhǔn)孔、陽性/陰性對照（若提供）。這些對照用于驗(yàn)證系統(tǒng)有效性、計(jì)算背景扣除及判斷實(shí)驗(yàn)是否成功。
更新時間：2025-11-24
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